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生物培養(yǎng)基
更新時間:2011-04-11   點擊次數(shù):2618次

絕大多數(shù)培養(yǎng)基是建立在平衡鹽溶液(BSS)基礎(chǔ)上,添加了氨基酸、維生素和其它與血清中濃度相似的營養(yǎng)物質(zhì)。zui廣泛應(yīng)用的培養(yǎng)基是Eearle`s MEM 的混合物,其中含有13種必須氨基酸、8種維生素。而Ham`s F12 也包括非必須氨基酸,維生素的范圍亦很廣,另外常規(guī)含有無機鹽和代謝添加劑
MEM/F12 這兩種培養(yǎng)基各取1/2,形成神經(jīng)生物學(xué)zui通用的培養(yǎng)基。

Dulbecco`s改良培養(yǎng)基——DMEM,現(xiàn)應(yīng)用于快速生長的細(xì)胞,同MEM含有相同的營養(yǎng)成分,但濃度高出2~4倍。選擇某種培養(yǎng)基,應(yīng)仔細(xì)了解成分表,應(yīng)知道大多數(shù)情形下培養(yǎng)基都有不足。例如,有些培養(yǎng)基在氨基酸中包括有谷氨酸,而這種培養(yǎng)基雖廣泛用于神經(jīng)生物學(xué)領(lǐng)域,但它對某些對谷氨酸敏感的可能有細(xì)胞外毒性損傷的神經(jīng)元而言,則并非*選擇,特別是如果神經(jīng)元生長在缺乏膠質(zhì)的環(huán)境中時。F12中含有硫酸亞鐵,據(jù)報道也有神經(jīng)毒效應(yīng)。  在所有這些培養(yǎng)基中,谷氨酸比其他氨基酸有更高的濃度,這是因為它具有不穩(wěn)定性以及在許多細(xì)胞培養(yǎng)中它常用作碳源。對于神經(jīng)元的培養(yǎng)常常在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中增加葡萄糖的含量到0.6%或者加入丙酮酸(若培養(yǎng)基中這兩種物質(zhì)缺乏時)。MEM與F12均要用5%的CO2來平衡,DMEM含更高濃度的NaCO3,要用10%的CO2來平衡,當(dāng)然也可以在較低CO2濃度下使用。這些基礎(chǔ)培養(yǎng)基的組成成分是建立在對不同細(xì)胞系生長的研究之上的,但通常在原代培養(yǎng)中使用也能有比較令人滿意的結(jié)果。原則上,HEPES作為緩沖劑可用來代替碳酸氫鹽,以解除需要高濃度CO2培養(yǎng)環(huán)境的限制。實際操作中并非如此簡單。顯然,溶解的CO2與碳酸氫鹽對良好的細(xì)胞生長是重要的。Leiboviz`s L15培養(yǎng)基可用來在大氣環(huán)境中令神經(jīng)細(xì)胞生長,該培養(yǎng)基采用了與眾不同的BSS作基礎(chǔ),它含有高濃度的氨基酸來提高緩沖能力,培養(yǎng)基中使用半乳糖作碳源,以阻止培養(yǎng)基中乳酸形成,少量溶解的CO2由丙酮酸代謝產(chǎn)生。這一培養(yǎng)基的優(yōu)點是明顯的,特別是在保持較高CO2有困難時,例如在長時間的顯微操作及生理學(xué)研究中。L15培養(yǎng)基已用來成功的培養(yǎng)了外周神經(jīng)元,但尚未在CNS神經(jīng)元的發(fā)育研究中全面檢測過。

細(xì)胞培養(yǎng)基應(yīng)用選擇選擇培養(yǎng)基沒有一定的標(biāo)準(zhǔn),有幾點建議可供參考: (1)建立某種細(xì)胞株所用的培養(yǎng)基應(yīng)該是培養(yǎng)這種細(xì)胞的培養(yǎng)基。可以查閱參考文獻,或在購買細(xì)胞株時咨詢。 (2) 其它實驗室慣用的培養(yǎng)基不妨一試,許多培養(yǎng)基可以適合多種細(xì)胞。 (3) 根據(jù)細(xì)胞株的特點、實驗的需要來選擇培養(yǎng)基。如小鼠細(xì)胞株多選 RPMI1640

 

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